Le palefrenier assure l'entretien et les soins quotidiens des chevaux. Souvent, il est appelé aussi agent d'élevage équin ou palefrenier soigneur. Il réalise le pansage, effectue la tonte et le toilettage, de la crinière à la queue. Il examine l’état des sabots et des fers, nettoie les premiers avec un cure-pied. En cas de besoin, c’est lui qui retire un fer mal posé ou qui risque de se détacher et de blesser l’animal. Il est également chargé de la distribution des rations alimentaires.
D'une façon générale, il veille au comportement de l’animal et à ses problèmes de santé dont il est le plus souvent le premier à s’apercevoir : boiterie, blessure. Il est capable d’effectuer les premiers soins : prise de température, observation de l’œil, traitements simples, en cas d’hémorragie par exemple. Lorsque qu’une jument met bas ou lors d'une intervention du vétérinaire, il donne un coup de main à ce dernier. Il consigne ces observations pour assurer un suivi de chaque animal.
Le palefrenier sort le cheval de son box (stalle) avec une longe pour le promener. Si le haras est orienté vers les activités de monte, le palefrenier ou assistant d'élevage équin peut intervenir également sur d'autres activités comme l'éducation des équidés, la préparation des séances d'entraînement, le transport des animaux pour les concours, l'entretien de la sellerie.
Le palefrenier-soigneur travaille dans un haras, un centre équestre, pour une écurie de compétition ou un éleveur privé. II exerce son activité sous l'autorité d'un responsable l'élevage ou d'un responsable de centre équestre. ll est souvent en relation avec le public.
Il assure l’entretien des écuries, nettoyage, rangement, désinfection, litière et surveille la température et la ventilation des lieux, l’état des abreuvoirs et des clôtures. L’entretien de la pâture, des paddocks et du manège d’un centre équestre lui incombe également.
Le travail du palefrenier commence à l’aube, (souvent en plein air), y compris les dimanches et jours fériés s’il est de service. Ses jours de congé sont alors en semaine. Il porte une tenue de travail car beaucoup de ses tâches sont salissantes (nettoyage des chevaux et des boxes).